Extraction and analysis with HPLC of catecholamine neurotransmitters
Aree / Gruppi di ricerca
Partecipanti al progetto
- De Francia Silvia (Responsabile di Progetto)
- Allegra Sarah
- Chiara Francesco
Descrizione del progetto
Central role of catecholamine neurotransmitters in neurodegenerative diseases is still poorly researched. Catecholamine neurotransmitters play a pivotal role in assessing nervous system function and related diseases, therefore their quantification in biological fluids is of great importance. We developed and validated according Food and Drug Administration (FDA) guidelines a convenient method for extraction and analysis with High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC) of catecholamine neurotransmitters in different biological fluids. Extraction and analysis for precise measurement available in scientific literature are still a challenge. Many protocols have been described for neurotransmitters measurement by a variety of instruments, including HPLC. However, there are shortcomings, such as complicated operation or hard-to-detect multiple targets, that can no longer be avoided. Presently, the dominant analysis technique is still HPLC, due to its high sensitivity and good selectivity. So we developed a detailed protocol for the pretreatment and detection of catecholamines with HPLC coupled with ultraviolet detection (HPLC-UV) in plasma and brain samples of mice. Now we are working to develop a specific genetic analysis aimed to detect polymorphisms potentially involved in neurodegenerative disorders aetiology.
Monitoring of catecholamine neurotransmitters levels by HPLC-UV coupled with genetic analysis of specific polymorphisms could real help to optimize treatment and outcome disease in patients affected by neurodegenerative diseases.
Il ruolo centrale delle catecolamine nelle malattie neurodegenerative è ancora scarsamente studiato. Tali neurotrasmettitori svolgono un ruolo fondamentale nella valutazione della funzionalità del sistema nervoso e delle malattie ad esso correlate, pertanto la loro quantificazione nei fluidi biologici è di grande importanza. A tale scopo abbiamo sviluppato e validato secondo le linee guida della Food and Drug Administration (FDA) un metodo utile per l'estrazione e l'analisi in cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC) di catecolamine in diversi fluidi biologici. I metodi di estrazione ed analisi attualmente disponibili in letteratura scientifica sono ancora imprecisi: tali metodi presentano carenze o si basano su operazioni complicate. Il metodo da noi sviluppato, semplice, sensibile e selettivo si basa su impiego di HPLC accoppiato con rilevamento in ultravioletti (HPLC-UV). Sinora abbiamo applicato tale metodologia a campioni di plasma e cervello di topi. Al momento stiamo anche lavorando per sviluppare un'analisi genetica specifica volta a rilevare eventuali polimorfismi potenzialmente coinvolti nell'eziologia dei disturbi neurodegenerativi. Il monitoraggio dei livelli di catecolamine mediante HPLC-UV accoppiato con l'analisi genetica di polimorfismi specifici potrebbe, dunque, aiutare a ottimizzare il trattamento delle malattie neurodegenerative.